Lančana reakcija polimerazom (PCR) je moderan alat za dijagnosticiranje različitih infekcija, karakteriziran visokom preciznošću. PCR analiza omogućuje prepoznavanje uzročnika zaraznih bolesti na temelju njihovog genetskog materijala (RNA ili DNA). Biološki materijal za istraživanje može biti krv, genitalni bris, slina itd.

KONZULTACIJE O REZULTATIMA ANALIZE ili ultrazvuka - 500 rubalja.

Metoda PCR otkrivena je 1983. godine. Njen tvorac Kary Mullis (SAD) za to je otkriće dobio Nobelovu nagradu za kemiju. Unutar prvih deset godina tehnika je postala obavezan laboratorijski test u cijelom svijetu, stekavši priznanje od znanstvenika i liječnika.

Medicinski centar Diana nudi provođenje istraživanja tehnikom lančane reakcije polimeraze u najkraćem mogućem roku i s najvećom razinom točnosti. Naša dijagnostička baza zadovoljava sve međunarodne standarde i zahtjeve.

Koje se infekcije mogu dijagnosticirati pomoću PCR-a?

Šalju se na dijagnostiku, odn. APCR analizaomogućuje dijagnosticiranje velikog broja različitih infekcija. Ova skupina također uključuje skrivene, asimptomatske bolesti koje su u razdoblju inkubacije:

Pomoću PCR metodamože se naći:

• hepatitis C, B;
• ureaplazmoza genitalnih organa;
• – ureaplazmoza, trihomonijaza, gardnereloza;
• klamidija genitalija i respiratornog trakta;
• bakterijska vaginoza;
• Infektivna mononukleoza;
• tuberkuloza;
• salmoneloza;
• tuberkuloza (plućni i izvanplućni oblici);
• listerioza, encefalitis koji prenose krpelji, lajmska bolest;
• , papiloma virus, ;
• dječje zarazne bolesti otkrivene tijekom trudnoće i prije začeća - zaušnjaci, difterija, ospice;
• HIV.

Za svaku od navedenih bolesti otkrivenu drugom metodom poželjno je učiniti PCR test. Uzročnici mnogih infekcija imaju nekoliko vrsta (sojeva), a točnija dijagnoza čini liječenje učinkovitijim. Budući da različite vrste patogena imaju vlastite metode prijenosa infekcije, točna identifikacija uzročnika pomaže u zaštiti drugih od infekcije. Primjerice, hepatitisom A se može dobiti preko zajedničkih predmeta i posuđa (bolest prljavih ruku), a hepatitisom C samo krvlju, medicinskim instrumentima i spolnim kontaktom. Ovo je važno za one koji su blizu pacijenta.

Bit metode lančane reakcije polimerazom

Metoda se temelji na identifikaciji patogena dijelovima DNA ili RNA. PCR podsjeća na forenzičku znanost, kada se zločinac pronalazi po komadićima kože ili dlake ostavljenim na mjestu zločina. Jer svaki živi organizam ima jedinstvenu strukturu DNK ili RNK. Metoda omogućuje točnu identifikaciju mikroorganizma, čak i ako je prisutan u materijalu koji se proučava u minimalnim količinama.

PRC je pogodan za identifikaciju latentnog prijevoza, atipičnih, izbrisanih i drugih oblika zaraznih bolesti. Dijagnostika je vrlo precizna i stoga praktički ne daje pogreške ili lažne rezultate. Analiza se često propisuje kao dodatni pregled za identifikaciju određene vrste virusa ili mikroba.

Prednosti i nedostaci PCR metode

PCR analiza je učinkovit dijagnostički alat koji omogućuje liječniku ne samo da ispravno odredi vrstu zaraznog patogena u tijelu pacijenta, već i broj mikroba. Ova značajka omogućuje PCR metodi učinkovito otkrivanje kroničnih infekcija, na primjer, virusnog hepatitisa.

Prednosti tehnike uključuju sljedeće značajke:

• Svestranost . Metoda omogućuje identifikaciju svih trenutno poznatih mikroorganizama, bez obzira na vrstu materijala koji se proučava.
• Specifičnost . PCR vam omogućuje da odredite DNA virusa ili bakterije sa 100% točnošću, što nije moguće ni s jednom drugom dijagnostičkom metodom.
• Osjetljivost – čak i jedan sićušni “komad” DNA ili RNA može se otkriti i identificirati zahvaljujući brzoj reakciji stvaranja kopija.
• Učinkovitost – dijagnoza se može postaviti na temelju lančane reakcije polimeraze unutar nekoliko sati nakon prikupljanja biološkog materijala, što omogućuje pravodobno započeti liječenje bolesti.
• Mogućnost kvantitativne analize . Ova značajka je važna u identificiranju bolesti uzrokovanih oportunističkom florom (na primjer, drozd). Povećan sadržaj gljivica candida u organizmu uzrokuje bolest, a normalna količina je do 10 3 - 104 CFU/tamp. - Ne.

Nedostaci PCR dijagnostike su potreba za visokotehnološkom opremom i visokokvalificiranim stručnjacima. Za analizu vam je potrebna posebna laminarna kutija, gdje se održava potrebna temperatura i osigurava čistoća eksperimenta.

Kako pravilno uzeti PCR test: priprema

Da biste točno razumjeli kako se pripremiti za nadolazeću PCR analizu, pacijent svakako mora provjeriti sa svojim liječnikom kakvu vrstu biološkog materijala planira uzeti. Priprema izravno ovisi o tome.

• Iscjedak iz spolnih organa, bris iz grlića maternice ili uretre, urin - ispitivanjem ove vrste materijala PCR metodom učinkovito se dijagnosticiraju infekcije spolnih organa.
• Virusni hepatitis C i HIV infekcija zahtijevaju uzimanje krvi za PCR analizu.
• Uz pomoć brisa grla možete potvrditi ili opovrgnuti prisutnost infektivne mononukleoze.

Bris kod žena

Za dijagnosticiranje spolno prenosivih infekcija pomoću PCR-a kod žena, u pravilu, uzimaju vaginalni bris. Tijekom trudnoće vrijede standardna pravila za pripremu za PCR analizu.

• Nekoliko dana prije PCR testa morate prestati koristiti ispiranje i proizvode za intimnu higijenu.
• Tjedan dana prije testa na infekcije trebate prestati uzimati sve vrste lijekova, naravno, ako nisu dio programa pripreme za PCR test koji vam je propisao liječnik.
• Nekoliko dana prije pregleda morate se početi suzdržavati od spolnih odnosa.
• Na dan PCR testa nema potrebe za pranjem, genitalna higijena se provodi večer prije, samo toplom vodom.
• Ne smijete mokriti nekoliko sati prije testa.

Razmaz kod muškaraca

Nije teško pripremiti se za uzimanje razmaza iz uretre za PCR. Dovoljno je pridržavati se dolje navedenih pravila.

• 2 dana prije PCR pregleda morate se početi suzdržavati od seksualnih odnosa.
• Lijekove treba prekinuti otprilike 7 dana prije testa, osim ako ih, naravno, nije izričito propisao liječnik.
• Genitalna higijena treba se provesti večer prije, a ne na dan PCR testa.
• Preporuča se ne mokriti otprilike 2-3 sata prije uzimanja testa.

Analiza krvi

Ako tijekom PCR analize krv pacijenta postane predmet proučavanja, pravila za pripremu za to su sljedeća.

• Optimalno vrijeme za davanje krvi je jutro, test se mora uzeti na prazan želudac (najmanje 8 sati bez hrane). Možete slobodno piti vodu.
• Prestanite piti alkohol jedan dan prije PCR testa, prestanite pušiti sat vremena prije njega.
• Ako vaše zdravlje dopušta ovu opciju, preporuča se neko vrijeme prestati uzimati lijekove.
• Prije davanja krvi trebate se odmoriti oko 20 minuta.
• Uoči PCR testa potpuno je isključeno emocionalno i fizičko preopterećenje, koje može utjecati na rezultate analize.

Kako se radi PCR test?

Za istraživanje se uzima bilo koje okruženje u kojem se patogen može nalaziti, ali najčešće se koriste:

• Krvni serum ili plazma – identificirati mnoge patogene – viruse hepatitisa B, C, D, G, herpes, HIV, citomegalovirus;
• Urin i sok prostate – kod dijagnosticiranja spolno prenosivih bolesti;
• Sputum, pleuralna tekućina, bronhoalveolarni lavaža – za dijagnostiku plućnih i izvanplućnih oblika tuberkuloze;
• Cerebrospinalna tekućina – za dijagnosticiranje infekcija živčanog sustava;
• Amnionska tekućina – za utvrđivanje intrauterinih infekcija;
• Bris grla – identificirati uzročnike infektivne mononukleoze i difterije;
  strugotine i mrlje iz sluznice za dijagnosticiranje spolno prenosivih bolesti;
  stanice želučane sluznice i želučanog soka – za prepoznavanje bakterije Helicobacter koja uzrokuje gastritis i čir.

S jednim uzorkom materijala može se otkriti nekoliko patogena koji su ušli u tijelo odjednom. Ova svestranost štedi pacijenta dodatnih pregleda i nepotrebnih troškova.

Moguće je otkriti i identificirati područja genetskih informacija korištenjem posebnih referentnih DNA markera (primera) stvorenih za svaki poznati patogen. Standard vam omogućuje da pronađete "svoj" fragment među milijunima drugih. Ako se to dogodi, započinje lančana reakcija polimeraze.

PCR reakcija čini ogroman broj kopija identificiranog dijela genetske informacije (replikacija). Važno je da se repliciraju samo dijelovi DNA i RNA potrebni za analizu. Stoga su čistoća eksperimenta i sposobnost osoblja da rukuje opremom i uzorcima tako važni.

Lančana reakcija odvija se vrlo brzo, već nakon dva sata dionica DNK se povećava milijune puta, što omogućuje otkrivanje i točnu identifikaciju infekcije. Za rad sa standardima, epruvete se stavljaju u poseban uređaj. Pomoću programa postavlja se algoritam koji nekoliko puta mijenja temperaturu medija i utječe na tijek reakcije. Rezultat PCR-a vidljiv je odmah nakon završetka studije.

Kako dešifrirati PCR analizu

Provođenje PCR studije omogućuje ne samo utvrđivanje vrste infekcije prisutne u tijelu pacijenta, već i procjenu s kvantitativnog gledišta (broj mikroba). Razumijevanje rezultata kvantitativnih PCR testova igra važnu ulogu u otkrivanju i testiranju učinkovitosti liječenja velikog broja kroničnih bolesti, poput hepatitisa C.

Rezultat PCR analize može biti pozitivan ili negativan odgovor.

• Negativan rezultat . U biološkom materijalu koji je bio predmet istraživanja tijekom PCR analize nisu otkriveni tragovi infekcije. U pravilu, na temelju negativnog rezultata, možemo pretpostaviti da doista nema infekcije u tijelu.
• Pozitivan rezultat. Ovaj rezultat PCR analize ukazuje na prisutnost tragova zarazne bolesti u biološkom materijalu bolesnika. Pozitivan rezultat PCR testa karakterizira visok stupanj točnosti.

Ponekad se infekcija otkriva u pozadini potpunog zdravlja i bez znakova bolesti. Neki pacijenti smatraju da je analiza učinjena pogrešno, ali stvarno stanje je drugačije. Ako PCR pokaže da je uzročnik u tijelu, onda je stvarno tamo. Samo što zarazne bolesti nikada ne počinju odmah nakon infekcije, imaju različito dugo razdoblje inkubacije.

Latentno razdoblje može trajati vrlo dugo, na primjer, kod AIDS-a - nekoliko godina, dok neki mehanizmi ne poguraju viruse na reprodukciju. Uzročnik se otkriva u tijelu nositelja i onih koji nisu završili liječenje. Vrlo često razne spolno prenosive bolesti prelaze u skriveni (latentni) oblik. U tom slučaju može biti potrebna dodatna laboratorijska dijagnostika.

Točnost interpretacije rezultata PCR analize

Metoda PCR, koja omogućuje otkrivanje prilično velikog broja infekcija, karakterizira povećana točnost, osjetljivost i specifičnost. Ove karakteristike pokazuju da PCR testiranje može:

• Odredite što je točnije moguće odsutnost ili prisutnost zaraznog patogena.
• Odredite što točnije specifičnu vrstu zaraznog patogena (specifičnost).
• Prepoznajte infekciju čak i ako je skrivena. Govorimo o niskoj razini prisutnosti mikrobne DNA u biološkom materijalu pacijenta koji se ispituje (osjetljivost).

Prednost PCR metode u odnosu na enzimski imunološki test i druge imunološke alate za otkrivanje infekcije je u tome što je manja vjerojatnost da će dati pogrešne rezultate. To jest, mnogo je manje vjerojatno da će dešifriranje PCR analize pokazati odsutnost zaraznih mikroba ako su prisutni u tijelu pacijenta.

Osim toga, gotovo se nikada ne događa da dekodiranje analize otkrije prisutnost nepostojeće infekcije u tijelu, odnosno daje lažno pozitivne rezultate.Naravno, rezultati PCR-a ne mogu se nazvati sto posto točnima, tako da potrebno je ovu studiju dopuniti drugim metodama.

Dijagnostika zaraznih bolesti različitih vrsta - i virusnih i bakterijskih - usmjerena je na identifikaciju patogena u ranoj fazi, što omogućuje propisivanje pravodobnog i posebno učinkovitog liječenja. Najsuvremenija metoda otkrivanja infekcija je PCR, što je skraćenica za lančanu reakciju polimerazom. Što je bit ove metode i za koju svrhu se provodi?

Suština reakcije polimeraze

Struktura bilo kojeg virusa i mikroorganizma sadrži molekule RNA ili DNA. Karakteristično je da su ti spojevi jedinstveni za svaku osobu, pa se izolacijom nukleinskih kiselina u krvnim testovima kod odraslih ili djece može postaviti dijagnoza s apsolutnom točnošću.

Nažalost, koncentracija DNA u uzorcima krvi i drugim biološkim materijalima je prilično niska, pa se ne može odrediti konvencionalnim dijagnostičkim metodama. Kako bi se riješio ovaj problem, jednom je izumljena lančana reakcija polimeraze.

Dakle, bit ove analize leži u specifičnoj obradi uzorka krvi, zbog čega se koncentracija molekula DNA u njemu povećava, a utvrđivanje njihove vrste u budućnosti omogućuje prepoznavanje vrste patogena, kao i izradu ispravna dijagnoza.

Kako se radi PCR test krvi?

PCR metoda se provodi samo u laboratorijskim uvjetima. Za njegovu provedbu koriste se posebni enzimi koji nekoliko puta povećavaju strukturu pacijentove RNA i DNA. U tom slučaju treba ih formirati toliki broj da se omogući vizualni pregled. Prilikom izmjere izrađuje se kopija površine koja u svemu udovoljava traženim uvjetima. Mnogima je zanimljivo što je PCR test krvi za RNA.

Laboratorij posjeduje potrebnu bazu podataka koja ukazuje na točnu strukturu različitih uzročnika infekcija. Korištenje PCR metode omogućuje ne samo određivanje vrste patogena, već i izračunavanje njegovog kvantitativnog udjela.

PCR dijagnostika također uključuje neke novine, uključujući sljedeće:

Povezivanje različitih fragmenata DNA;

Uvođenje mutacije;

Utvrđivanje očinstva i sl.

Koje se bolesti otkrivaju pomoću PCR-a?

Zahvaljujući PCR-u moguće je otkriti gotovo sve bakterijske i virusne patologije. Za istraživanje se može koristiti ne samo krv, već i drugi biološki materijali, kao što su razmazi iz uretre i cerviksa, sline i sperme. Analiza postaje prilično informativna kada uzročnik određene bolesti uđe u ljudsku krv. Zbog toga je PCR test krvi propisan za sljedeće patologije:

Virusni hepatitis tipovi A, B, C, D i TT;

Herpes infekcija (to jest, virusi prvog, drugog i četvrtog tipa);

Citomegalovirus;

Enterovirusna infekcija;

HIV infekcija;

rubeola;

Listerioza;

Šindre;

Infektivna mononukleoza;

Toksoplazmoza.

Ako uzmemo u obzir provedbu PCR-a pomoću drugih biomaterijala, tada na popis patologija koje se mogu identificirati ovom metodom treba dodati sljedeće:

Salmoneloza;

Difterija;

Gardnereloza;

mikoplazmoza;

Tuberkuloza;

trihomonijaza;

- infekcija papiloma virusom (stotinjak različitih sojeva humanog papiloma virusa).

PCR analiza krvi tijekom trudnoće za TORCH infekcije, koje uključuju toksoplazmozu, citomegalovirus, herpesvirusnu infekciju i rubeolu, sada je postala posebno relevantna. To je zbog činjenice da gore navedene bolesti mogu uzrokovati abnormalnosti u razvoju fetusa.

Prednosti PCR-a

Koje su prednosti ove metode?

• Stopostotna dijagnostička točnost: ako je u krvi prisutno barem nekoliko fragmenata DNA uzročnika, oni će se utvrditi PCR reakcijom, što znači da će se postaviti točna dijagnoza. Upravo je to glavna razlika između ove metode i drugih dijagnostičkih metoda - opći test krvi, ELISA i drugi.
• Specifičnost. Kod provođenja PCR testa krvi za boreliozu, na primjer, ne postoji nešto poput lažno negativnog ili lažno pozitivnog rezultata, što ga razlikuje od enzimskog imunološkog testa ili ELISA-e.
• Analiza se može provesti za određivanje nekoliko uzročnika odjednom na temelju jednog uzorka biomaterijala, što ovu metodu čini pogodnom za pacijenta, jer ne mora biti testiran nekoliko puta.
• Brzina. Nema potrebe za izolacijom i uzgojem patogena na posebnim hranjivim medijima, što je potrebno tijekom bakteriološkog pregleda. Gotov rezultat možete dobiti izravno na dan analize.

• Pomoću PCR testa krvi za hepatitis, na primjer, utvrđuje se skriveni patogen u tijelu kada pacijent djeluje kao nositelj infekcije (HIV ili hepatitis).
• Pristupačna cijena. Trošak PCR analize za određivanje jednog patogena kreće se od dvjesto pedeset do pet stotina rubalja. Polukvantitativno testiranje na viruse košta malo više - oko tisuću rubalja.

Nedostaci metode

PCR je visokotehnološka metoda istraživanja koja postavlja povećane zahtjeve za laboratorijsku opremu. Prostorija za analizu mora nužno imati biološki filter, budući da zrak uvijek sadrži čestice sline i kože, koje sadrže molekule DNK. Ako se ne pridržavate tehničkih zahtjeva za rad s biomaterijalima, to može dovesti do pogrešne dijagnoze.

Tko treba napraviti PCR test krvi?

Svatko može pristupiti studiji. Indikacija za to je sumnja na spolno prenosive infekcije (HIV infekcija, gardnereloza, klamidija). Ako slučajno dođe do nezaštićenog seksualnog kontakta, samo PCR će omogućiti postavljanje točne dijagnoze u ranoj fazi, ako je osoba zaražena određenom bolešću.

Trudnice, kao i one koje tek planiraju začeti dijete, moraju donirati krv kompleksu TORCH.

Iako je PCR najučinkovitija dijagnostička metoda, ne morate se usredotočiti na nju. Potrebno je sveobuhvatno ispitati pacijenta u prisutnosti bilo koje patologije. Ako lančana reakcija polimeraze omogućuje određivanje patogena, tada je zahvaljujući serološkoj studiji moguće procijeniti razinu učinkovitosti terapije, odgovor ljudskog tijela na patogen i lijekove. PCR test krvi za HIV mora propisati liječnik.

Značajke postupka i pripreme

Pacijenti koji se pregledaju PCR metodom dobivaju najpouzdanije rezultate. Mora se reći da je u ovom slučaju vjerojatnost pogrešaka gotovo potpuno eliminirana. Rezultati ove analize pripremaju se vrlo brzo, što olakšava određivanje dijagnoze i omogućuje pravovremeno propisivanje potrebnih postupaka liječenja.

Pouzdanost rezultata dobivenog PCR metodom određena je ispravnim predajom biološkog materijala na ispitivanje. Ne smije biti kontaminiran ničim, inače rezultat neće biti objektivan.

• zabrana spolnog odnosa jedan dan prije postupka;
• krvni test za otkrivanje infekcija treba uzeti ujutro i samo na prazan želudac;
• urin se također daje ujutro u sterilnu posudu.

Jedan i pol ili dva dana nakon postupka, PCR test krvi će biti dešifriran i rezultat će biti spreman. Postoje čak i slučajevi kada rezultate možete dobiti isti dan.

Kako pripremiti materijal za analizu?

Kako bi studija bila što uspješnija, potrebno je pravilno uzeti materijal od pacijenta i izvršiti odgovarajuću pripremu. Opće je poznata činjenica da se u laboratorijskim istraživanjima veliki broj pogrešaka (i do otprilike sedamdeset posto) događa upravo tijekom pripreme uzorka.

Trenutačno neki laboratoriji prikupljaju krv pomoću vakuumskih sustava. S jedne strane minimalno ozljeđuju pacijenta, as druge strane omogućuju uzimanje materijala tako da ne dolazi u kontakt ni s okolinom ni s osobljem. Zahvaljujući tome može se izbjeći kontaminacija biološkog materijala i što je više moguće osigurati pouzdanost analize.

Dekodiranje rezultata

Rezultat PCR testa krvi može biti pozitivan ili negativan. Ako je krvni test negativan, to ukazuje na odsutnost zaraznih patogena u materijalu koji je donirao pacijent. Pozitivan nalaz potvrđuje da u krvi postoje uzročnici infekcije, što znači da je potrebno što učinkovitije i kvalitetnije liječenje bolesnika.

Rezultat može biti pozitivan čak iu nedostatku bilo kakvih simptoma bolesti. To ukazuje ili na početak patološkog procesa ili da je osoba nositelj. Ako se otkrije potonji, nisu potrebni nikakvi postupci liječenja. U tom slučaju, pacijentu se preporučuje stalno praćenje liječnika, što znači, na primjer, periodično testiranje PCR testova krvi za herpes i druge infekcije.

Najčešće se nalaze u uretri, u strugotinama iz cervikalnog kanala i u slini. Međutim, moramo imati na umu da bolesna osoba može zaraziti potpuno zdrave ljude, čak i ako ga bolest ni na koji način ne muči. Može postati kronična. Mora se reći da ako se PCR-om dobije pozitivan rezultat, potrebno je propisati odgovarajuće postupke liječenja.

Kvantitativna PCR karakterizacija

PCR test krvi za infekcije također je karakteriziran kvantitativno. Ovaj rezultat može procijeniti samo stručnjak, jer je individualan za različite infekcije. To je kvantitativna karakteristika koja omogućuje liječniku da odredi stupanj aktivnosti takvog patološkog procesa i odredi točan stupanj razvoja određene bolesti.

Proučavanje dobivenih rezultata pomoći će stručnjaku da odabere odgovarajući lijek i odredi potrebnu dozu.

Dijagnostička točnost

Tri su najvažnije karakteristike PCR-a, a to su:

Osjetljivost;

Specifičnost;

Točnost.

Dijagnostika infekcija pomoću PCR-a ima veliku vjerojatnost otkrivanja uzročnika infekcije u tijelu. Analiza krvi i drugih tekućina vrlo je specifična. Zahvaljujući njemu, možete lako odrediti određeni infektivni proces uzimajući, na primjer, PCR test krvi za hepatitis ili HIV. PCR dijagnostika također je vrlo osjetljiva. Ako ispitni materijal sadrži minimalnu količinu infektivnih agenasa, PCR metoda će uvijek biti pozitivna.

U vrlo rijetkim slučajevima može se dobiti lažno pozitivan rezultat. U nedostatku infekcije, bit će negativan.

Otkrivanje skrivenih bolesti

Ako se sumnja da osoba ima STI, propisuje se krvni test za određivanje skrivenih infekcija. Sve bolesti genitalnog područja mogu se utvrditi samo pregledom pacijenta.

Sljedeće bolesti mogu imati skrivenu prirodu:

• ureaplazmoza;
• klamidija;
• mikoplazmoza;
• herpes;
• gonoreja;
• gardnereloza.

Te su infekcije prilično česte i vrlo podmukle. U početku bolesti nemaju jasno izražene simptome, pa se bolesnici ne obraćaju specijalistu. Rezultati pravodobnog PCR testa krvi za klamidiju, boreliozu i druge infekcije pomoći će liječniku da propisuje učinkovito liječenje.

SPI imaju negativan učinak na reproduktivni sustav. Mogu uzrokovati neplodnost ili defekte u fetusu. Zbog toga je važno napraviti PCR test prije planiranja trudnoće.

PCR (lančana reakcija polimerazom) dostignuće je molekularne biologije, jedna od glavnih metoda kliničke laboratorijske dijagnostike s kraja 20. i početka 21. stoljeća, koja donosi golemu korist u raznim područjima medicinske znanosti.

Dakle, čak i ako među milijunima stanica ljudskog tijela nije izgubljen sam živi virus, već samo čestica njegove DNK, tada će PCR, ako ga ništa ne ometa, vjerojatno nositi sa zadatkom i prijaviti prisutnost "stranca" s pozitivnim rezultatom. To je bit PCR-a i njegova glavna prednost.

Prednosti i nedostatci

Laboratorij koji provodi PCR dijagnostiku podliježe najvišim zahtjevima u pogledu opreme, test sustava i osposobljenosti medicinskog osoblja. Ovo je visokotehnološki laboratorij koji ima arsenal visokoosjetljivih i visoko specifičnih reagensa, tako da nema nekih posebnih nedostataka. Osim ako daje pozitivan rezultat u odsutnosti kliničkih manifestacija i time kliničara stavlja u dilemu: isplati li se započeti liječenje ili ne?

Liječnik koji promatra pacijenta počinje sumnjati u pouzdanost rezultata testa, jer ne vidi nikakve znakove bolesti. Ali ipak, s obzirom na visoku osjetljivost PCR sustava, treba imati na umu da detektira patogen čak iu pretkliničkoj fazi, a pozitivan rezultat u ovom slučaju više je prednost nego nedostatak. Na temelju toga, liječnik mora sam odlučiti o uputnosti terapije, uzimajući u obzir druge argumente za i protiv.

Prednosti dijagnostike pomoću lančane reakcije polimerazom su očite:

• Visoka specifičnost, dosežući 100%, zbog prisutnosti u odabranom uzorku čestica nukleinske kiseline svojstvenih određenom organizmu, ali stranih ljudima;
• Visoke performanse, jer je PCR visokotehnološka automatizirana tehnika koja pruža mogućnost da se testiranje obavi na dan uzorkovanja i na taj način oslobodi pacijenta nepotrebnih briga;
• PCR, koji radi na jednom uzorku, može provesti nekoliko studija i otkriti više patogena, ako ona ima takav zadatak. Primjerice, kod dijagnosticiranja klamidijske infekcije, gdje je PCR jedna od glavnih metoda, uz klamidiju se može otkriti i Neisseria (gonokok), uzročnik. Štoviše, to ne utječe negativno na pouzdanost rezultata;
• PCR testiranje otkriva opasne mikroorganizme tijekom razdoblja inkubacije, kada još nisu imali vremena uzrokovati značajnu štetu tijelu, odnosno rana dijagnoza upozorava na nadolazeći razvoj patološkog procesa, što omogućuje pripremu za njega i potpuno spreman.

Osim toga, kako bi se izbjegli nesporazumi koji ponekad nastaju tijekom dijagnostike, PCR se štiti i time što se njegovi rezultati mogu snimati (foto, računalo) kako bi se po potrebi mogli koristiti u stručne svrhe.

Norma za PCR odgovore je negativan rezultat., što ukazuje na odsutnost fragmenata stranih nukleinskih kiselina, pozitivan odgovor će ukazivati ​​na prisutnost infekcije u tijelu, digitalne vrijednosti pokazuju stanje virusa i njegovu koncentraciju u vrijeme testiranja. Međutim, potpunu interpretaciju analize provodi liječnik koji je prošao posebnu obuku na temu "PCR". Nema smisla pokušavati sami protumačiti rezultate, jer možete, što se najvjerojatnije događa, krivo shvatiti i početi brinuti unaprijed.

Čega se PCR “boji”, što može učiniti i kako se za njega pripremiti?

Kao i kod svakog drugog istraživanja, ponekad su rezultati testa lažno pozitivni ili lažno negativni, gdje PCR nije iznimka. To se može dogoditi u sljedećim slučajevima:

1. Povrede tehnološkog procesa u jednoj od faza reakcije;
2. Nepoštivanje pravila prikupljanja materijala, skladištenja ili transporta;
3. Prisutnost stranih nečistoća u materijalu.

To upućuje na to da se PCR dijagnostici infekcija mora pristupati oprezno, oprezno i ​​precizno jer u suprotnom uzorci materijala mogu promijeniti svoju strukturnu strukturu ili potpuno propasti.

Faze PCR dijagnostike. Lažni rezultati mogu biti uzrokovani kršenjem u bilo kojoj fazi studije.

PCR dijagnostika infekcija spada među ostale laboratorijske metode u kategoriju “zlatnog standarda” pa se njome mogu tražiti uzročnici mnogih bolesti koje na prvi pogled nemaju ništa zajedničko:

• Tuberkuloza različitih lokalizacija, upala pluća (uključujući atipične, uzrokovane klamidijom);
• Infekcije u djetinjstvu (ospice, rubeola, zaušnjaci, ospice);
• Difterija;
• Salmoneloza;
• Zoonotska zarazna bolest - listerioza (bolest je obilježena različitim simptomima s oštećenjem limfnih čvorova, središnjeg živčanog sustava i unutarnjih organa);
• Bolesti uzrokovane Epstein-Barr virusom (infektivna mononukleoza, itd.);
• Onkološka patologija uzrokovana infekcijom humanim papiloma virusom (HPV i njegove vrste);
• Borrelioza (lajmska bolest, encefalitis koji prenose krpelji);
• Helicobacter pylori infekcija, čiji je uzročnik mikrob Helicobacter pylori koji živi u ljudskom želucu. Dokazano je da Helicobacter uzrokuje razvoj raka želuca ili dvanaesnika;
• i gotovo sve.

PCR dijagnostika spolno prenosivih infekcija je od posebne važnosti, budući da tako uzrokovane bolesti često prolaze dugo bez ikakvih kliničkih manifestacija, ali tijekom trudnoće počinju se aktivirati i time ugrožavati zdravlje, pa i život djeteta. dijete. Slično se ponašaju. Neki od njih (“baklja”) također se odnose na SPI, tako da potonje zahtijevaju detaljnije razmatranje. Čitatelj će se moći upoznati s najpopularnijim metodama u sljedećim odjeljcima članka.

Kako se pravilno pripremiti za dobivanje pouzdanih rezultata?

Odmah napomenimo da je priprema za PCR vrlo jednostavna i ne zahtijeva nikakav poseban napor od strane pacijenta. Trebate izvršiti samo tri jednostavna zadatka:

1. Nemojte imati spolni odnos 24 sata prije uzimanja testa;
2. Da biste uzeli i testirali krv iz vene, morate doći na prazan želudac; usput, ne možete ni piti;
3. Urin treba donirati noću (ujutro - u sterilnu staklenku kupljenu dan prije u ljekarni).

PCR može raditi u bilo kojem biološkom okruženju

PCR metoda nije "krvoločna" i stoga prihvaća bilo koji biološki medij koji sadrži sumnjivi uzročnik infekcije. Obično izbor što uzeti za istraživanje ostaje na liječniku.

Dakle, u potrazi za patogenom, osim analize krvi (iako je i ona prikladna i u većini slučajeva uzima se paralelno s drugim materijalom), možete koristiti:

• (iscjedak iz urogenitalnog trakta);
• Struganje sluznice usne šupljine, konjunktive, nazofarinksa, genitalnog trakta (za žene, iz cerviksa i vagine, za muškarce - iz uretre);
• Slina;
• Sperma;
• Sok za prostatu;
• Placentalno tkivo i amnionska tekućina (amnionska tekućina);
• Sediment urina (nakon centrifugiranja), na primjer, za otkrivanje nekih SPI i Mycobacterium tuberculosis;
• Sputum i pleuralna tekućina za istu svrhu;
• eksudati;
• Cerebrospinalna tekućina ako se sumnja na infekciju središnjeg živčanog sustava;
• Biopsijski materijal (bioptat) uzet iz jetre, dvanaestopalačnog crijeva, želuca itd.

Na navedeno dodajem da će u svim slučajevima biti dovoljno materijala za testiranje, čak iu strugotinama i sekretu, budući da testiranje PCR-om ne zahtijeva velike količine, za analizu je dovoljno nekoliko mikrolitara koji se obično uzimaju. u Eppendorfovu mikroepruvetu i poslana na ispitivanje.

Bolesti i primjena PCR-a

HIV i lančana reakcija polimerazom

Obično se kod anonimnog pregleda, u slučaju pozitivnih rezultata imunoblotinga, dijagnoza ponovno ponavlja. Ako je dijagnoza potvrđena, pacijentu se propisuju dodatni testovi:

1. Utvrđivanje imunološkim reakcijama apsolutnih vrijednosti broja CD 4 limfocita (imunokompetentnih stanica - T-helpera ili pomagača), koje infekcija najprije zahvaća, nakon čega gube svoja osnovna svojstva i ne mogu razlikovati "svoje" i "strano". Zamijene virusnu RNK koja cirkulira u krvnoj plazmi za normalne tjelesne stanice i ne reagiraju na njih;
2. Detekcija virusne RNA PCR-om i izračunavanje koncentracije virusnih čestica kako bi se na temelju tih podataka odredio stadij, težina patološkog procesa i prognoza. Naravno, riječ "norma" u tom pogledu ne postoji, jer je reakcija uvijek pozitivna, a dešifriranje digitalnih vrijednosti je u nadležnosti liječnika.

PCR i hepatitis

PCR metodom mogu se otkriti uzročnici, najčešće se test koristi za dijagnosticiranje hepatitisa C, koji je teško otkriti drugim metodama.

Virus hepatitisa C (koji sadrži RNA) svojim ponašanjem u ljudskom tijelu podsjeća na HIV. Uglavljen u genom jetrenih stanica (hepatocita), ondje ostaje čekati svoje vrijeme, koje može doći za najmanje 2 godine, čak i za 20 godina, zbog čega su ga liječnici prozvali “nježni ubojica”. Hepatitis C dovodi do stvaranja malignog procesa u parenhimu jetre, koji se manifestira u kasnijim fazama. Imunološki sustav ne primjećuje sve te događaje, pogrešno misleći da je virus hepatocit. Istina, antitijela na virus se proizvode u određenim količinama, ali ne daju pristojan imunološki odgovor. Za dijagnosticiranje hepatitisa C, ELISA nije jako informativan, jer pokazuje da je virus ostavio tragove, ali nije poznato da li je otišao sam od sebe. Kod HCV-a poznati su slučajevi samoizlječenja, dok antitijela protiv virusa ostaju i nastavljaju cirkulirati cijeli život (imunološka memorija). PCR je znatno ispred stvaranja antitijela i može otkriti virusnu česticu unutar 1-1,5 tjedana, dok se antitijela mogu pojaviti u intervalu od 2 mjeseca do šest mjeseci

PCR dijagnostika u slučaju sumnje na pojavu virusa hepatitisa C u ljudskom tijelu je najoptimalnija metoda istraživanja, jer samo ona može prepoznati prisutnost "nježnog neprijatelja" u krvi ili biopsiji jetre pacijenta.

Međutim, ponekad postoje slučajevi kada su antitijela pozitivna, ali PCR rezultat je negativan. To se ponekad događa kada je količina virusa vrlo niska ili kada je u "uspavanom" stanju u jetri bez ulaska u krvotok. Kako bi se otkrila istina, pacijentu se daje drugi test, ili čak više od jednog.

Infekcija humanim papiloma virusom

Ukoliko ne dođe do samoizlječenja, može se, a da se ni na koji način ne pokaže, dugo zadržati u organizmu domaćina, koji to i ne sluti, budući da PCR nije rađen, a simptoma bolesti nije bilo. bolest. Međutim, prisutnost papiloma virusne infekcije, iako latentna, nije ravnodušna za ljudsko zdravlje, gdje određene vrste virusa koji uzrokuju rak (tipovi 16, 18) predstavljaju posebnu opasnost.

Ženska polovica populacije češće boluje od HPV-a, budući da virus preferira žensko genitalno područje, a posebno cerviks, gdje neke vrste virusa pridonose razvoju displastičnih procesa, a potom i raka vrata maternice, ako se displazija ne liječi. a virusu se daju odriješene ruke. Dakle, lančana reakcija polimeraze otkrit će DNK virusa, a zatim pokazati da se "loš" ili "dobar" (onkogeni ili neonkogeni) tip nastanio u tijelu žene.

Druge SPI i TORCH infekcije

Očito, lančana reakcija polimeraze može pronaći bilo koju stranu strukturu koja se sastoji od nukleinskih kiselina, tako da je ovaj test prikladan za identifikaciju svih spolno prenosivih bolesti i TORCH infekcija, međutim, ne koristi se uvijek. Zašto, recimo, provoditi tako skupe studije za otkrivanje gonokoka, ako postoje dostupnije i jeftinije?

TORCH infekcije i spolno prenosive bolesti toliko su međusobno povezane da je ponekad teško odrediti u koju skupinu treba svrstati određeni uzročnik. Općenito, može ih biti teško razumjeti, budući da se radi o dosta raznolikim skupinama mikroorganizama koji se mogu spolno prenositi uvijek ili samo pod određenim uvjetima (imunodeficijencija), a mogu biti zanimljivi samo tijekom trudnoće, zbog mogućeg negativnog utjecaja na njegov tijek i na plod.

PCR je glavna metoda za otkrivanje skrivenih infekcija

Razvoj kliničkih manifestacija temelji se na različitim patogenima, koji se mogu otkriti samo PCR-om, što je njegova glavna zadaća, ponekad zajedno s ELISA-om, a ponekad kao jedini potvrdni test, osobito ako nema simptoma bolesti. Takvu tešku situaciju može stvoriti polimikrobna infekcija, koja osim očitih uzročnika uključuje i oportunističke uzročnike.

Ureaplazma se često razmatra zajedno s mikoplazmom. I to nije bez razloga. Ove vrste, poput klamidije, nisu ni virusi ni bakterije; žive unutar stanica i klasificiraju se kao spolno prenosive bolesti, iako njihova prisutnost u zdravom tijelu također nije neuobičajena. Dakle, kako bi se razlikovao zdrav nositelj od bolesne osobe, potrebne su posebne metode, gdje se PCR smatra najpouzdanijim, budući da su, zbog strukturnih značajki i ponašanja ovih mikroorganizama, druge studije neučinkovite.

Što se tiče (tip 1, 2) i, koji također pripada herpes virusima (tip 5), situacija je i ovdje dvosmislena. Stopa zaraženosti svjetske populacije se približava 100%, pa je u ovom slučaju vrlo važna identifikacija virusa i njegove doze, što posebno igra ulogu tijekom trudnoće, jer za odraslu osobu virus koji se udomaćio u njegovom tijelu često ne uzrokuje nikakve probleme i ne daje znakove bolesti.

Stoga ne treba zanemariti takav pregled koji propisuje liječnik, jer je u nekim slučajevima lančana reakcija polimerazom obavezna i neophodna metoda laboratorijske dijagnostike koja može zaštititi ne samo ženu, već i malu, nerođenu osobu od ozbiljnih komplikacija.

Zaključno, želio bih napomenuti da tako divna metoda kao PCR služi čovječanstvu više od 30 godina. Istodobno, ciljevi testa nisu ograničeni na traženje uzročnika zaraznih bolesti. Lančana reakcija polimeraze, rođena na temelju molekularne biologije, neraskidivo je povezana s genetikom, uspješno se koristi u forenzici za osobnu identifikaciju, u sudskoj medicini za utvrđivanje očinstva, u veterini, ako klinika za životinje ima mogućnost nabave skupe opreme, kao iu drugim područjima (industrija, poljoprivreda i sl.).

Video: PCR - suština i primjena

PCR analiza, malo tko zna što je to, iako je danas jedna od inovativnih metoda za dijagnosticiranje zaraznih bolesti, za koju je njen tvorac dobio Nobelovu nagradu 1993. godine. Ova visokotehnološka metoda omogućuje vam otkrivanje ozbiljnih bolesti u ranoj fazi i pravodobno započinjanje njihovog liječenja.

Analiza se temelji na principima molekularne biologije. PCR istraživanje uključuje korištenje posebnog enzima koji pod utjecajem temperaturnih uvjeta kopira RNA i DNA bakterija i virusa prisutnih u prikupljenom biomaterijalu. Takva masovna reprodukcija omogućuje liječniku da točno odredi kojoj vrsti pripada bakterija koja je uzrokovala bolest, kao i da izmjeri razinu njegove koncentracije u biomaterijalu. Postupak kopiranja provodi se u posebnom aparatu - termocikleru, koji zagrijava i hladi epruvete s prikupljenim materijalom, stvarajući pogodne uvjete za replikaciju.

PCR testiranje se provodi iz više razloga, ali najčešće se koristi za utvrđivanje prisutnosti zaraznih bolesti kao što su:

• herpes;
• spolno prenosive infekcije - klamidija, ureaplazmoza, gardnereloza, trihomonijaza;
• kandidijaza;
• hepatitis;
• mononukleoza;
• listerioza;
• citomegalovirus;
• tuberkuloza;
• ljudski papiloma virus;
• krpeljni encefalitis.

PCR analiza nije ograničena samo na svoju primjenu u medicini, probir se često radi ako je potrebno shvatiti tko je vlasnik biološkog materijala pronađenog na mjestu zločina, odnosno PCR analiza ima široku primjenu u forenzičkoj znanosti. Treba napomenuti da se uzima bris ili krv za PCR ako je potrebno utvrditi očinstvo. Rezultati PCR dijagnostike nisu ni na koji način inferiorni od uobičajene DNK analize srodstva, a i mnogo su jeftiniji.

Dijagnostičke značajke

PCR analiza ima ogroman broj pozitivnih aspekata. Prije svega, važno je napomenuti osjetljivost testa. PCR analizator je u stanju detektirati bakterijske DNA molekule čak iu malim količinama, odnosno liječnik dobiva informaciju o ranoj fazi bolesti ili početku kroničnog oblika bolesti. PCR test krvi može čak odrediti prisutnost zarazne bolesti, koja je u latentnom obliku i ne pokazuje se ni na koji način.

Treba napomenuti da se PCR analiza kod muškaraca i žena može provesti u prisutnosti bilo koje vrste materijala, to ne mora biti krv ili bris, slina, stanice kože, pa čak i urin.

Rezultati PCR testova mogu biti opsežni, budući da PCR dijagnostika infekcija može odmah uhvatiti nekoliko uzročnika koji se nalaze u jednom uzorku biomaterijala. Pregled se može obaviti u bilo koje prikladno vrijeme, što analiza pokazuje da osoba može saznati u kratkom vremenskom razdoblju, budući da su dijagnostički rezultati biomaterijala spremni unutar 5 sati.

Svi se liječnici slažu da test krvi za PCR ili drugi materijal nikada ne daje lažne rezultate ako se ispravno slijedi dijagnostička metodologija. PCR pozitivan ili PCR negativan može biti lažan samo ako laboratorijsko osoblje nema visoku razinu profesionalnosti. Ako je zaplijenjeni biomaterijal bio kontaminiran ili je pogrešno pohranjen, tada bi interpretacija PCR analize mogla imati iskrivljene rezultate.

Priprema za dijagnostiku

PCR bris se uzima iz cerviksa žena ako je potrebno odrediti spolno prenosive bolesti, na primjer, klamidiju, ureaplazmu ili herpes. Ako je potrebno PCR testiranje na te bakterije kod muškarca, tada mu se uzima iscjedak iz mokraćne cijevi – sok prostate, drugim riječima. Krv se testira PCR metodom ako se želi utvrditi hepatitis, toksoplazmoza i HIV. PCR test se radi na mononukleozu i citomegalovirus uzimanjem brisa iz ždrijela. Lančana reakcija polimeraze za prisutnost plućnih infekcija provodi se uz prisutnost biomaterijala kao što je ispljuvak ili pleuralna tekućina.

PCR se provodi tijekom trudnoće ako postoji sumnja na intrauterine infekcije, kao i bolesti i patologije fetalnog živčanog sustava. Kao biomaterijal za istraživanje od trudnice se uzima tkivo placente. Ako osoba ima oštećenje živčanog sustava, ispituje se cerebrospinalna tekućina. Za identifikaciju bakterija kao što je Helicobacter pylori koriste se biopsije želuca i dvanaesnika.

PCR testiranje urina također se često koristi, ali je manje poželjno od testa krvi. Omogućuje vam da vidite prisutnost patogenih mikroorganizama koji izazivaju zarazne bolesti, ali ne može naznačiti njihov točan broj i stupanj razvoja bolesti. PCR urina koristi se ako iz nekog razloga nije moguće izvaditi krv ili napraviti razmaz. Također treba napomenuti da se PCR urina može koristiti za proučavanje infekcija u male djece. Pretragom urina također se može utvrditi prisutnost infekcije i upale u mjehuru, utvrditi kamenje, pijesak, kao i cistitis i uretritis.

Kao što je gore spomenuto, možete uzeti PCR test ako imate biomaterijal. PCR analiza, znate što je to, također morate znati kako se pripremiti za dijagnozu. Priprema izravno ovisi o tome što treba ukloniti, na primjer, morate donirati urin nakon pažljive higijene genitalija ujutro. Krv se daje na prazan želudac, tijekom darivanja, odnosno dan prije, morate prestati uzimati bilo kakve lijekove. Ako postoje kronične bolesti, popis odobrenih lijekova za uporabu odlučuje pojedinačno liječnik.

Analiza stolice provodi se ujutro nakon pažljive pripreme. Uoči testa potrebno je izbjegavati tešku hranu i izvršiti temeljitu higijenu spolnih organa. Analiza stolice bit će nepouzdana ako je biomaterijal uklonjen klizmom, potrebno je prirodno spuštanje materijala. Za davanje sline nije potrebna priprema, dovoljno je prestati pušiti ili piti sok od citrusa.

Prije podnošenja biomaterijala za određivanje bolesti koje se prenose spolnim putem, pacijenti su dužni isključiti seksualni kontakt dva dana prije PCR dijagnoze. Ženama je zabranjeno uzimati bris cerviksa tijekom menstruacije dva dana nakon menstruacije, inače će PCR interpretacija imati iskrivljene podatke.

Rezultati probira

Samo kvalificirani liječnik može detaljno objasniti što PCR analiza govori o stanju određenog pacijenta, neće biti lako samostalno razumjeti podatke navedene u obrascu. Ako tražite od liječnika da dešifrira podatke, on će prije svega reći je li nalaz pozitivan ili negativan. Ako je analiza negativna, to znači da je osoba zdrava i da u ispitivanom materijalu nisu pronađene bakterije. U slučaju pozitivnog nalaza, naznačena je točna vrsta uzročnika i njegova količina, također možete saznati točan period kada je došlo do infekcije prema prisutnosti određenih imunoglobulina.

Postoji nekoliko klasa imunoglobulina koji mogu jasno odražavati stanje pacijenta:

1. IgG se razvija u krvi unutar 4 tjedna od infekcije i može ostati u krvi i do nekoliko godina. Oni nisu uvijek pokazatelji bakterija, ponekad služe kao sjećanje tijela da se jednom susrelo sa sličnim tipom patogena.
2. IgM - pojavljuju se na samom početku nakon infekcije. U pravilu su vidljivi već 5. dan, to su prvi branitelji tijela koji napadaju bakteriju. Nestaju iz krvnog nalaza nakon dva tjedna. Ako su prisutni u testu krvi, onda se može pretpostaviti da se infekcija dogodila nedavno, prije otprilike tjedan dana.
3. IgA signalizira akutni razvoj bakterijske infekcije u tijelu ili stadij ponavljanja kronične bolesti.

Postoji niz slučajeva kada analiza pokazuje pozitivan rezultat, ali se osoba uopće ne osjeća loše. To uopće ne ukazuje na dijagnostičku pogrešku, nego na kronični oblik bolesti koji je u stanju mirovanja ili se bolest tek razvija. U ovom trenutku nema dovoljno bakterija koje mogu izazvati simptome.

Sada znate princip analize i možete se prijaviti za ovu dijagnozu ako postoji i najmanja sumnja na zaraznu bolest. Trajanje daljnjeg liječenja i njegova učinkovitost izravno ovise o tome koliko brzo prođete dijagnostiku, koja je praktički bezbolna. Kako biste stalno održavali svoje zdravlje na dobroj razini, preporuča se jednom godišnje podvrgnuti preventivnoj PCR dijagnostici za prisutnost spolno prenosivih bolesti, kao i infekcija drugih organa. Bolje je spriječiti bolest nego se kasnije baviti njezinim posljedicama.

Lančana reakcija polimerazom poznata je već 30 godina. Široko se koristi u mnogim područjima, od arheologije do genetike.

Metoda PCR pomaže u utvrđivanju očinstva, ali najčešće se koristi za identifikaciju različitih zaraznih bolesti u ljudskom tijelu.

Kako se radi PCR analiza i što je to? Pokušat ćemo detaljno odgovoriti na ova pitanja.

PCR analiza - što je to?

Lančana reakcija polimerazom (PCR) je visokoprecizna molekularna genetička dijagnostička metoda koja vam omogućuje prepoznavanje različitih zaraznih i nasljednih bolesti kod ljudi, kako u akutnom tako iu kroničnom stadiju, i mnogo prije nego što se bolest može manifestirati.

PCR metoda je apsolutno specifična i, ako se pravilno izvodi, ne može dati lažno pozitivan rezultat. Odnosno, ako nema infekcije, onda analiza nikada neće pokazati da ona postoji. Stoga, sada vrlo često, za potvrdu dijagnoze, dodatno uzimaju PCR test za određivanje patogena i njegove prirode.

Lančanu reakciju polimerazom (PCR) razvio je Kary Mullis (SAD) 1983. godine, za što je 1993. godine dobio Nobelovu nagradu za kemiju.

Koja je prednost ove metode?

Dijagnostika ovom metodom omogućuje vam pronalaženje patogena izravno u genu koji se nalazi u materijalima koji se proučavaju. Ovo je najprecizniji test za spolno prenosive infekcije, skrivene infekcije i razne spolno prenosive bolesti.

Razlike između PCR dijagnostike i drugih laboratorijskih istraživačkih metoda su kako slijedi:

• metoda je usmjerena na identifikaciju samog patogena;
• Dijagnostika pomoću PCR metode razlikuje se po svojoj svestranosti: za otkrivanje nekoliko patogena;
• bolesti dovoljan je samo jedan biološki uzorak bolesnika;
• metoda je vrlo osjetljiva i nije popraćena drugim križnim reakcijama.

Osim toga, prednost PCR dijagnostike je što je bilo koji biološki materijal pacijenta prikladan za analizu: krv, genitalni sekret, urin, sperma.

Koje infekcije može otkriti PCR bris?

U tijelu može biti prisutan veliki broj zaraznih agenasa, uključujući "skrivene" koji se dugo ne manifestiraju.

PCR analiza razmaza omogućuje vam otkrivanje takvih infekcija:

• ureplasmosis genitalnih organa;
• kandidijaza();
• herpes;
• prisutnost stanica raka;
• procijeniti hormonski status;

Testni materijal za PCR obično je ispljuvak, slina, urin i krv. Prije provođenja analize morate se pažljivo pripremiti za nju prvo se posavjetujte s liječnikom.

Krv za PCR obično se daje na prazan želudac. Dobri rezultati pokazuju analizu kada se materijal za istraživanje uzima iz cervikalnog kanala ili uretre. U ovom slučaju, najbolje je provesti PCR dijagnostiku najkasnije jedan dan nakon spolnog odnosa.

Vrste PCR-a

PCR se koristi u mnogim područjima za testiranje i znanstvene eksperimente. Postoje različite metode analize:

1. Reverzna transkripcija PCR(Reverse Transcription PCR, RT-PCR) - koristi se za umnožavanje, izolaciju ili identifikaciju poznate sekvence iz RNA biblioteke.
2. Invertirani PCR(Inverzna PCR) - koristi se kada je poznata samo mala regija unutar željene sekvence. Ova metoda je posebno korisna kada se radi o određivanju susjednih sekvenci nakon što je DNK umetnuta u genom.
3. Ugniježđeni PCR koristi se za smanjenje broja nusproizvoda reakcije. Koriste se dva para primera i provode se dvije sekvencijalne reakcije.
4. Asimetrični PCR(eng. Asymmetric PCR) - provodi se kada je potrebno umnožiti pretežno jedan od lanaca izvorne DNA. Koristi se u nekim tehnikama analize sekvenciranja i hibridizacije.
5. Kvantitativni PCR(Kvantitativni PCR, Q-PCR (engleski)) ili PCR u stvarnom vremenu - koristi se za izravno praćenje mjerenja količine specifičnog PCR produkta u svakom reakcijskom ciklusu.
6. Step-by-step PCR (Touchdown PCR) - korištenjem ovog pristupa smanjuje se utjecaj nespecifičnog vezanja početnica.
7. Grupno specifična PCR(eng. group-specific PCR) - PCR za srodne sekvence unutar iste ili između različitih vrsta, koristeći konzervativne početnice za te sekvence.

Ako je nukleotidni slijed predloška djelomično poznat ili uopće nepoznat, mogu se koristiti degenerirani primeri, čiji slijed sadrži degenerirane položaje u kojima se može nalaziti bilo koja baza. Na primjer, niz primera može biti: ...ATH..., gdje je H A, T ili C.

Koji biološki materijali se proučavaju?

Razni biološki mediji i ljudske tekućine mogu poslužiti kao materijal za PCR istraživanje, u kojem se može otkriti strana bakterijska DNA ili virusna DNA ili RNA:

1. Urin. Može se koristiti za infekcije genitourinarnog trakta kod muškaraca i mokraćnih organa kod žena (kod muškaraca korištenje urina kao materijala zamjenjuje struganje epitela).
2. Sputum. Koristi se za dijagnostiku tuberkuloze, a rjeđe za dijagnozu respiratornih oblika klamidije i mikoplazmoze. Sputum u količini od 15-20 ml skuplja se u sterilnu (jednokratnu) bočicu.
3. Biološke tekućine. Sok prostate, pleuralna, spinalna, amnionska tekućina, zglobna tekućina, bronhoalveolarni lavaž, slina prikupljaju se prema indikacijama.
4. Strugotine epitela sa sluznice. Obično se koristi za dijagnosticiranje spolno prenosivih bolesti (STD), kao što su gonoreja, klamidija, mikoplazmoza, ureaplazmoza, trihomonijaza, gardnereloza, herpes i druge infekcije koje zahvaćaju sluznicu.
5. Biopsije. Najčešće se za otkrivanje infekcije Helicobacter pylori koriste biopsije želuca i dvanaesnika.
6. Krv, plazma, serum. Koristi se za PCR analizu hepatitisa B, C, D, G, herpesa, CMV, HIV virusa, te istraživanje ljudskih gena.

Kako se pripremiti za test?

Pouzdanost rezultata PCR izravno ovisi o ispravnom podnošenju materijala za ispitivanje. Materijal ne smije biti kontaminiran, inače rezultat studije neće biti objektivan. Najvažnije preporuke prije poduzimanja PCR testa uključuju sljedeće zahtjeve:

1. Urin se skuplja ujutro u sterilnu posudu.
2. Krvni test za infekcije mora se uzeti ujutro na prazan želudac.
3. Ne biste trebali biti spolno aktivni dan prije testa.

Rezultat analize bit će spreman 1,5-2 dana nakon dotičnog postupka. Postoje situacije kada se rezultat može pripremiti isti dan.

Dekodiranje OPC analize

Proces interpretacije prikazanog istraživanja odlikuje se jednostavnošću. Rezultati PCR analize mogu se dobiti 1,5-2 dana nakon predaje materijala. U nekim slučajevima nalaz je spreman već prvi dan, a evo što oni mogu značiti:

• Negativan rezultat pokazuje da dijagnostički materijal ne sadrži željeni uzročnik.
• PCR pozitivan znači da je DNA ili RNA patogena prisutna u ljudskom tijelu.

U nekim slučajevima mikroorganizmi se kvantificiraju. To se posebno odnosi na bolesti uzrokovane oportunističkim mikroorganizmima. Budući da te bakterije svoje negativne učinke ispoljavaju samo u prevelikim količinama.

Također, kvantitativna PCR analiza važna je za odabir terapijske taktike te u svrhu praćenja liječenja virusnih infekcija kao što su HIV i virusi hepatitisa.

Koliko je točna PCR dijagnoza infekcija?

PCR metodu karakterizira visoka točnost, specifičnost i osjetljivost. To znači da ova analiza može:

• točno odrediti prisutnost ili odsutnost infekcije;
• točno navesti o kakvoj se infekciji radi (specifičnost);
• otkriti infekciju čak i s vrlo niskim sadržajem mikrobne DNA u biološkom materijalu,
• koji je ispitan (osjetljivost).

PCR analiza: cijena i vrijeme

Cijena pojedinog testa ovisi o tome na koju infekciju ćete se testirati. Okvirne cijene i termini:

1. STI: 300-500 rubalja, termini – 1 dan;
2. Epstein-Barr virus, humani papiloma virus, herpes, citomegalovirus: 300-500 rubalja, termini - 1 dan;
3. Hepatitis A, B, C, D, G: kvalitativna analiza 650 rubalja, kvantitativna analiza 2000 rubalja. Uvjeti – do 5 dana;
4. Antitijela na virus hepatitisa C, ukupna (Anti-HCV) – 420 rubalja;
5. Antitijela na virus hepatitisa C, IgM (Anti-HCV IgM) – 420 rubalja;
6. Helicobacter pylori: 300-400 rubalja, termini - 1 dan;
7. HIV (antitijela i antigeni) – 380 rubalja;
8. HIV RNA, visoka kvaliteta – 3500 rubalja;
9. HIV RNA, kvantitativno - 11 000 rubalja.

Kako biste uštedjeli novac, možete odabrati fiksni paket analize. Ovu uslugu pruža većina klinika u kojima se možete testirati PRC metodom (invitro, onclinic itd.).